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细胞示踪

活细胞荧光示踪探针FDA[荧光素二乙酸盐]

产品编号:B0301       CAS#:       Ex (nm):494 Em(nm):            分子式: 分子量:B0301        溶剂:DMSO        包装:1 g 供货状态:3-5天        储存条件:低温避光-20 零售价格: 984.00

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产品描述

FDA(荧光素二乙酸酯)是一种非荧光疏水性荧光素衍生物,可以通过细胞膜(包括哺乳动物和细菌细胞),因此细胞内酯酶水解产生高荧光产物荧光素的二乙酸酯基团。荧光素分子在具有完整膜的细胞中积累,作为细胞活力的标记。不具有完整细胞膜或活性代谢的细胞可能不会积聚荧光产物,因此不会表现出绿色荧光。FDA可以与PI染色组合使用,因为非活细胞摄取PI并将死细胞染成红色,而活细胞不吸收PI并且应该仅染色绿色。与单色分析相比,非活细胞和活细胞的这种双色分离可以提供更准确的细胞活力定量。

 

产品编号

产品名称

规格

价格

B0301

活细胞荧光示踪探针 FDA[荧光素二乙酸盐]

1g

984RMB

 操作步骤 1.准备2-10 mM DMSO储备溶液 将4.2mg溶于1ml DMSO中以制备10mM储备溶液(1mg / ml相当于~2.4mM) 注意:应立即使用原液; 应将任何剩余的溶液等分并在<-20℃冷冻。 避免反复冻融循环,避免光照。 

               2.准备染料工作溶液 在使用之前,通过用Hanks和20mM Hepes缓冲液(HHBS)或您选择的缓冲液(pH7)稀释步骤1中的DMSO储备溶液,准备1至20μM染料工作溶液。通过涡旋混合均匀。   

               3.用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞:

              3.1用测试化合物细胞培养一段所需的时间。

              3.2离心细胞,每管2-10×105个细胞。 

              3.3在500μL染料工作溶液中重悬细胞(来自步骤2)。 

              3.4在室温或37°C下用染料溶液孵育细胞15至30分钟,避光。 

              3.5从细胞中取出染料工作溶液,用HHBS或您选择的缓冲液清洗细胞。 将细胞重悬于500μL预热的HHBS或培养基中,得到每管2-10×105个细胞。

              3.6用流式细胞仪(FL1通道)或荧光显微镜观察Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光变化。 注意:对于细菌细胞染色:当通过测试细菌过夜生长预处理的营养肉汤中1:800稀释储备溶液时,染色是最有效的,但也可以使用新鲜营养肉汤或PBS。 

                  细菌悬浮液应用PBS 稀释至每毫升105-107个生物。 可以通过将1ml溶液施加到.45μm过滤器(25mm)并真空过滤除去溶液,然后加入1ml染料溶液并在室温下孵育5-10分钟来染色细菌。


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