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细胞凋亡

Caspase 3/7荧光底物Ac-DEVD-AFC 绿

产品编号:E0102       CAS#:       Ex (nm):380 Em(nm):            分子式: 分子量:E0102        溶剂:DMSO        包装:5 mg 供货状态:3-5天        储存条件:低温避光-20 零售价格: 1236.00

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产品描述

半胱氨酸蛋白酶在细胞凋亡或程序性细胞死亡中是必需的,在发育和成年生活的大多数其他阶段,并且因其在细胞中的作用而被称为刽子手蛋白质。免疫系统中也需要一些半胱天冬酶用于淋巴细胞的成熟。细胞凋亡失败是肿瘤发展和自身免疫疾病的主要原因之一。半胱天冬酶也参与缺血和阿尔茨海默病。凋亡caspase有两种类型:引发剂和效应剂。 启动子半胱天冬酶(例如,CASP2CASP8CASP9CASP10)切割效应半胱天冬酶的无活性前体形式,从而激活它们。效应子半胱天冬酶(例如,CASP3CASP6CASP7)依次切割细胞内的其他蛋白质底物,以触发细胞凋亡过程。该级联反应的起始受半胱天冬酶抑制剂的调节。

产品编号

产品名称

规格

价格

E0102

胱天蛋白酶Caspase 37

荧光底物Ac-DEVD-AFC 绿

5 mg

1236RMB

 

操作方法

1.使用AMC,AFC,pNA,R110和ProRed底物的一般溶液Caspase测定

1.1在DMSO中制备10mM储备溶液。

1.2制备2X半胱天冬酶底物(50μM)测定溶液,如下所示:

50 L基质原液

100L DTT(1M)

400L EDTA(100 mM)

10mL Tris缓冲液(20mM),pH = 7.4

1.3将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液(来自步骤1.2)混合,并在室温下孵育溶液至少1小时。

1.4使用荧光酶标仪检测荧光,或使用吸光度酶标仪检测吸光度。

2.细胞Caspase检测使用细胞渗透FMK半胱天冬酶探针

2.1在DMSO中制备2-5mM储备溶液。

2.2根据需要对细胞进行处理。

2.3通过用20mM Hepes缓冲液(HHBS)稀释Hanks中的DMSO储备溶液(来自步骤2.1),制备2X可渗透的半胱天冬酶底物(20μM)测定溶液。

2.4用2X半胱天冬酶底物测定溶液(来自步骤2.3)混合等体积的处理细胞,并将细胞在37℃,5%CO 2培养箱中孵育至少1小时。

2.5用HHBS洗涤细胞至少一次。

2.6用流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

3.细胞Caspase检测使用细胞渗透性FMK Caspase探针(仅适用于#13470-13476)

3.1通过向小瓶中加入50μLDMSO制备250X储备溶液。

3.2根据需要对细胞进行处理。

3.3将250 X DMSO储备溶液(来自步骤3.1)以1:250的比例(例如2 uL至500 uL细胞)添加到细胞溶液中,并将细胞在37°C,5%CO 2培养箱中孵育1 小时。

3.4用HHBS洗涤细胞至少一次。

3.5用流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。


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