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细胞凋亡

胱天蛋白酶Caspase 9荧光底物 FITC-C6-DEVD-FMK 绿

产品编号:E0103       CAS#:       Ex (nm):492 Em(nm):            分子式: 分子量:E0103        溶剂:DMSO        包装:100 ug 供货状态:3-5天        储存条件:低温避光-20 零售价格: 2544.00

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产品描述

胱天蛋白酶的活化在细胞凋亡中发挥着主要作用。FITC-C6-DEVD-FMK提供了在活细胞中灵敏检测活化的胱天蛋白酶-3的方便手段。FITC-DEVD-FMK是细胞渗透性的,无毒的,并且不可逆地结合到活化的胱天蛋白酶-3在细胞凋亡。在FITC标记的可用于直接检测活化的胱天蛋白酶的凋亡细胞可通过荧光显微镜,流式细胞仪,或荧光板读数器进行。

操作方法

以下协议仅提供指导,应根据您的特定需求进行修改。

使用AMC,AFC,pNA,R110和ProRed底物的常规解决方案胱天蛋白酶测定

1.在DMSO中准备10 mM的储备溶液。

2.如下准备2X半胱天冬酶底物(50 µM)分析溶液:50 µL底物原液,100 µL DTT(1M),400 µL EDTA(100 mM),10 mL Tris Buffer(20 mM),pH = 7.4。

3.将等体积的半胱天冬酶标准品或样品与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合,并在室温下孵育至少1小时。

4.使用荧光酶标仪监测荧光,或使用酶标仪监测吸光度。

使用细胞渗透性FMK Caspase探针的细胞Caspase测定

1.在DMSO中准备2-5 mM的储备溶液。

2.根据需要处理细胞。

3.通过用20 mM Hepes缓冲液(HHBS)在Hanks中稀释DMSO储备溶液(来自步骤2.1),制备2X渗透性半胱天冬酶底物(20 µM)分析溶液。

4.将等体积的处理过的细胞与2X半胱天冬酶底物测定溶液混合(来自步骤2.3),并在37°C,5%CO2的培养箱中孵育细胞至少1小时。

5.用HHBS清洗细胞至少一次。

6.通过流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。

使用细胞渗透性FMK Caspase探针进行细胞半胱天冬酶测定(仅适用于#13470-13476)

1.通过向小瓶中加入50 µL DMSO制备250X储备液。

2.根据需要处理细胞。

3.以1:250的比例将250 X DMSO储备溶液添加到细胞溶液中(例如2 µL至500 µL细胞),并将细胞在37°C,5%CO2的培养箱中孵育1小时。

4.用HHBS清洗细胞至少一次。

5.通过流式细胞仪,荧光显微镜或荧光酶标仪监测荧光强度。


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