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细胞凋亡

Annexin V, FITC标记

产品编号:E0202       CAS#:       Ex (nm):494 Em(nm):            分子式: 分子量:E0202        溶剂:Water        包装:100test 供货状态:3-5天        储存条件:低温避光-20 零售价格: 2544.00

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产品描述

膜联蛋白是在钙存在下与磷脂膜结合的蛋白质家族。膜联蛋白V是研究细胞凋亡的有用工具。它被用作探针以检测在细胞表面上表达磷脂酰丝氨酸的细胞,这是细胞凋亡中发现的特征以及其他形式的细胞死亡。有多种参数可用于监测细胞活力。膜联蛋白V-染料结合物广泛用于通过测量磷脂酰丝氨酸(PS)的易位来监测细胞凋亡。在细胞凋亡中,PS被转移到质膜的外部小叶。磷脂酰丝氨酸在细胞表面上的出现是细胞凋亡的初始/中间阶段的通用指示,并且可以在观察到形态变化之前检测到。该荧光FITC-膜联蛋白V缀合物广泛用于通过流式细胞仪或荧光显微镜监测细胞凋亡。对于基于膜联蛋白V的细胞凋亡检测的微孔板检测,我们建议您使用我们的Cell Meter 试剂盒。

 

产品编号

产品名称

规格

价格

E0202

Annexin V, FITC标记

100 tests

2544RMB

操作步骤

1.用膜联蛋白V缀合物制备和孵育细胞:

1.1     制备膜联蛋白V缀合测定缓冲液:10mM HEPES,140mM NaCl和2.5mM CaCl 2,pH 7.4。

1.2     用测试化合物处理细胞一段所需的时间(用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时)以诱导细胞凋亡。

1.3     离心细胞,得到1-5×10 ^5个细胞/管。

1.4     将细胞重悬于200μLAnnexin V结合测定缓冲液中(来自步骤1.1)。

1.5     在细胞中加入2μL膜联蛋白V结合物。

可选:在细胞内加入死细胞染色剂如碘化丙锭,用于坏死细胞。

1.6     余ncubate在室温下进行30至60分钟,避光。

1.7     在用流式细胞仪或荧光显微镜分析细胞之前,加入300μLAnnexin V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)以增加体积(参见下面的步骤1.8)。

1.8     使用流式细胞仪或荧光显微镜监测荧光强度(参见下面的步骤2或3)。

2.使用流式细胞仪分析:

通过使用具有适当过滤器的流式细胞仪来量化膜联蛋白V缀合物。

注意:粘附细胞上的膜联蛋白V 结合流式细胞术分析未经常检测,因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。

3.使用荧光显微镜分析:

3.1     移液器从步骤1.6,将细胞悬浮液冲洗1-2次用甲nnexin V-结合测定缓冲液(来自步骤1.1) ,然后与A重悬细胞 nnexin V-结合测定缓冲液(来自步骤1.1) 。将细胞添加到盖有玻璃盖玻片的载玻片上。

注意:对于粘附细胞,建议直接在盖玻片上生长细胞。与膜联蛋白V缀合物(步骤1.6)孵育后,用Nnexin V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)冲洗1-2次,并将A nnexin V结合测定缓冲液(来自步骤1.1)加回到盖玻片中。在玻璃载玻片上翻转盖玻片并观察细胞。在与膜联蛋白V缀合物孵育后,细胞也可以在2%甲醛中固定,并在显微镜下观察。

3.2     在荧光显微镜下用适当的滤光片分析膜联蛋白V缀合物的凋亡细胞。


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