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Cell Meter APC-Annexin V细胞凋亡检测试剂盒 适合于流式细胞仪

浏览量
产品编号
E0701
产品编号:
E0701
CAS#:
Ex (nm):
651
Em (nm):
662
分子式:
分子量:
溶剂:
包装:
100 Tests
储存条件:
低温避光-20℃
供货状态:
3-5天
零售价:
2340.00
没有此类产品
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产品详情

膜联蛋白V可以与包括APC的荧光染料缀合。这种形式保留了其对磷脂酰丝氨酸(PS)的高亲和力,因此可用作流式细胞仪分析正在经历细胞凋亡的细胞的敏感探针。由于PS的外化发生在细胞凋亡的早期阶段,APC膜联蛋白V染色可以在比基于核变化(例如DNA片段化)的测定更早的阶段鉴定细胞凋亡。 APC膜联蛋白V染色先于膜完整性的丧失,这伴随着由细胞凋亡或坏死过程引起的最新细胞死亡阶段。因此,APC膜联蛋白V染色通常与重要染料如碘化丙啶(PI)或7-氨基放线菌素(7-AAD)联合使用,以使研究人员能够识别早期凋亡细胞(7-AAD阴性,APC)膜联蛋白V阳性)。具有完整膜的活细胞排除7-AAD,而死亡和受损细胞的膜对7-AAD是可渗透的。例如,被认为存活的细胞是APC膜联蛋白V和7-AAD阴性,而早期细胞凋亡的细胞是APC膜联蛋白V阳性和7-AAD阴性,而晚期凋亡或已经死亡的细胞都是APC膜联蛋白V和7-AAD阳性。该测定不区分经历凋亡性死亡的细胞与由于坏死途径而死亡的细胞,因为在任一情况下,死细胞将用APC膜联蛋白V和7-AAD染色。然而,当随时间测量细胞凋亡时,通常可以从APC膜联蛋白V和7-AAD阴性(存活或无可测量的细胞凋亡)追踪细胞,APC膜联蛋白V阳性和7-AAD阴性(早期细胞凋亡,膜完整性存在) )最后到APC膜联蛋白V和7-AAD阳性(末期凋亡和死亡)。细胞通过这三个阶段的运动表明细胞凋亡。相比之下,单个观察结果表明细胞本身是APC膜联蛋白V和7-AAD阳性,它们揭示了关于细胞经历其死亡的过程的较少信息。

 

产品编号

产品名称

规格

价格

E0701

Cell Meter APC-Annexin V细胞凋亡检测试剂盒 适合于流式细胞仪

100 Tests

2340RMB

储备溶液配制

1. APC-Annexin V原液(100X):
将含有0.2%BSA的200μLPBS加入到APC-膜联蛋白V缀合物(组分A)的小瓶中并充分混合以制备100X APC-膜联蛋白V储备溶液。 注意:将重构的100X APC-Annexin V储备溶液储存在4 ℃。 除非另有说明,否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。

操作步骤

1.用测试化合物处理细胞一段所需的时间(用星形孢菌素处理的Jurkat细胞4-6小时)以诱导细胞凋亡。注意:膜粘附细胞的膜联蛋白V流式细胞术分析未经常检测,因为在细胞分离或收获期间可能发生特定的膜损伤。

2.离心细胞,得到1-5×105个细胞/管。

3.将细胞重悬于200μL测定缓冲液(组分B)中。

4.向细胞中加入2μL100XAPC-膜联蛋白V原液。

5.可选:将2μL100X碘化丙啶(组分C)加入细胞中,用于坏死细胞。

6.在室温下孵育20至60分钟,避光。

7.可选:在使用流式细胞仪分析细胞之前,添加200至300μL的测定缓冲液(组分B)以增加体积。

8.使用具有FL4通道的流式细胞仪(Ex / Em = 635 / 660nm)监测APC-膜联蛋白V的荧光强度。当碘化丙啶加入细胞时,使用FL2通道测量细胞活力

 

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