Cell Meter 荧光法胞内总ROS检测试剂盒 绿色荧光

活性氧分子（ROS）是氧正常代谢过程的固有副产品，在细胞信号及转导过程中扮演着重要的角色。然而，在氧化应激阶段，ROS水平显著增加。ROS的积聚导致细胞结构的重大破坏。氧化应激通常在心血管疾病，糖尿病，骨质疏松，中风，炎症以及许多神经变性疾病和癌症中被被发现。ROS的测定能帮助我们理解氧化应激如何调节改变的胞内途径。Amplite ROS荧光法检测试剂盒使用我们独特的ROS指示器在活细胞中测定ROS。Amplite ROS Green是细胞通透的，当它与ROS反应时能产生绿色的荧光。本试剂盒具备优化的即用配制，能与高通量筛选的液体控制设备相配。Amplite ROS荧光法检测试剂盒能提供敏感的、一步荧光实验来检测活细胞中胞内的ROS，仅需一小时的孵育。本实验能在96孔或者384孔微孔板中进行，可以实现自动化无需分离步骤。它的信号能轻松被荧光酶标仪或者荧光显微镜读取。

溶液配制

1.储备溶液配制

除非另有说明，否则所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1. 1Amplite ROS Green原液（500X）：
将40μLDMSO（组分C）加入到Amplite ROS Green（组分A）的小瓶中并充分混合以制备500X Amplite  ROS Green原液。 避光。 注意：20μL的500X Amplite ROS Green原液足以容纳1个平板。 

2.制备工作溶液

将20μL500XAmplite ROS Green储备溶液加入10 mL分析缓冲液（组分B）中，充分混合，制成Amplite ROS Green工作溶液。

注意：此Amplite ROS Green工作溶液在室温下稳定至少2小时。

操作步骤

1.将100μL/孔（96孔板）或25μL/孔（384孔板）的Amplite ROS Green工作溶液加入细胞板中。

2.将细胞在5％CO₂,37℃培养箱中孵育1小时。

3.用所需缓冲液（如PBS或HHBS）中的20μL11X测试化合物（96孔板）或10μL6X测试化合物（384孔板）处理细胞。 对于对照孔（未处理的细胞），加入相应量的化合物缓冲液。

4.为了诱导ROS，将细胞板在室温下或在5％CO₂,37℃培养箱中孵育至少15分钟或所需的一段时间（对于用1mM H₂O₂处理的Hela细胞30分钟）。

5.使用荧光酶标仪（底部读取模式）在Ex / Em = 490 / 525nm（截止= 515nm）监测荧光增加，或使用具有FITC滤光器组的荧光显微镜观察细胞。