Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 绿色荧光 适合流式细胞检测

Cell Meter Annexin V凋亡检测试剂盒 绿色荧光 适合流式细胞检测 通过对磷脂酰丝氨酸(PS)进行检测，而实现细胞凋亡的检测。在凋亡细胞中，磷脂酰丝氨酸（PS）从胞内移位到胞外表面，因此PS出现在细胞的外表面可以作为细胞凋亡的起始或者中间阶段的通用指示器，也可以通过其形态学改变来测定。该试剂盒采用独有的绿色荧光染料（FITC的优越替代物，使用FITC通道检测）标记的Annexin V检测凋亡细胞，同时包含PI红色荧光染料用于对坏死细胞进行染色。试剂盒内组分经过特别优化，尤其适合于流式细胞分析。目前商业化各种Annexin V凋亡检测试剂盒一般是将Annexin V进行传统的荧光团（FITC、Cy3）标记后作为荧光探针，通过检测细胞凋亡早期细胞膜外翻的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine, PS），从而实现对细胞凋亡的检测。然而目前的检测受到荧光颜色、荧光强度和检测灵敏度等因素的限制。Cell Meter Annexin V Binding Apoptosis Assay Kit系列产品分别采用了mFluor Violet和iFluor荧光染料，这种染料比传统的FITC、Cy3等具有更高的荧光强度、更低的荧光背景和更优秀的光稳定性，因此检测效果更灵敏稳定；而iFluor系列染料在保证上述优势的同时，均在405nm处激发，尤其适合用于多色分析。

操作步骤

1.用测试化合物处理细胞一段时间（用喜树碱处理的Jurkat细胞4-6小时）以诱导细胞凋亡。

2.离心细胞，得到1-5×10⁵个细胞/管。

3.将细胞重悬于200μL测定缓冲液（组分B）中。

4.将2μL膜联蛋白V-iFluor 488（组分A）加入细胞中。

5.可选：加入2μL100X碘化丙啶（成分C）用于坏死细胞。

6.在室温下孵育30至60分钟，避光。

7.可选：在使用流式细胞仪分析细胞之前，添加200至300μL的测定缓冲液（组分B）以增加体积。

8.使用具有FL1通道的流式细胞仪（Ex / Em = 490 / 525nm）监测膜联蛋白V-iFluor 488的荧光强度。当碘化丙啶加入细胞时，使用FL2通道测量细胞活力。